DNA………………………………………………………………………………………………………..
39
3-10- آزمون بازدارندگي رشد عوامل بيماري زاي گياهي………………………………………………………………….
39
3-10-1- تهيه سوسپانسيون باکتري ها……………………………………………………………………………………………
39
3-11- اثر تلقيح باکتري هاي اندوفيت روي پارامتر رويشي گياه…………………………………………………………
40
3-11-1- مرحله کاشت………………………………………………………………………………………………………………..
40
3-11-2- مرحله داشت و تنک کردن……………………………………………………………………………………………..
41
3-12- اندازه گيري طولي گياه……………………………………………………………………………………………………….
41
فصل چهارم : نتايج
4-1- جداسازي باکتري هاي اندوفيت از ريشه گياهان دارويي……………………………………………………………
42
4-2- نتايج تست هاي بيو شيميايي…………………………………………………………………………………………………
44
4-3- تعيين توالي محصولات نهايي PCR………………………………………………………………………………………
45
4-3-1- نتايج حاصل از سکوئنسينگ ژن 16 s rDNA باکتري……………………………………………………….
45
4-4- نتايج آنتاگونيسمي بدست آمده از سويه هاي باسيلوس عليه قارچ هاي مورد آزمايش……………………
58
4-4-1- نتايج اثر ضد قارچي عليه آسپرژيلوس نايجر……………………………………………………………………….
59
4-4-2- نتايج اثر ضد قارچي عليه فوزاريوم اکسيپوروم…………………………………………………………………….
60
4-4-3- نتايج اثر ضد فارچي عليه آلترناريا آلترناتا……………………………………………………………………………
62
4-4-4- نتايج اثر ضد قارچي عليه موکور………………………………………………………………………………………..
63
4-5- نتايج اندازه گيري رشد طولي گياه………………………………………………………………………………………….
65
4-5-1- نتايج اندازه گيري رشد طولي در گياه مارچوبه…………………………………………………………………….
66
4-5-2- نتايج اندازه گيري رشد طولي در گياه نعناع فلفلي………………………………………………………………..
67
منابع……………………………………………………………………………………………………………………………………………
72
فهرست جداول
عنوان
صفحه
1-1- راهنماي آسان شناسايي تجربي سويه هاي شاخص باسيلوس……………………………………………………
22
3-1- مواد شيميايي استفاده شده……………………………………………………………………………………………………
32
3-2- محيط هاي مورد نياز براي انجام تست هاي بيوشيميايي…………………………………………………………..
36
3-3- توالي پرايمر طراحي شده براي s rDNA 16……………………………………………………………………….
37
3-4- مواد لازم جهت انجام PCR…………………………………………………………………………………………
40
3-5- استاندارد هاي مک فارلند…………………………………………………………………………………………………….
39
4-1- ويژگي هاي بيوشيميايي سويه هاي بدست آمده……………………………………………………………………..
43
4-2- نتايج شناسايي مولکولي سويه هاي باکتريايي جدا شده در سطح جنس و گونه……………………………
57
4-3- نتايج آنتاگونيسمي سويه هاي باسيلوس عليه قارچ ها………………………………………………………………
58
4-4- نتايج اثر ضد قارچي عليه آسپرژيلوس نايجر………………………………………………………………………….
58
4-5- نتايج اثر ضد قارچي عليه فوزاريوم اکسيپوروم……………………………………………………………………….
60
4-6- نتايج اثر ضد قارچي عليه آلترناريا آلترناتا………………………………………………………………………………
61
4-7- نتايج اثر ضد قارچي عليه موکور…………………………………………………………………………………………..
62
4-8- نتايج اندازه گيري رشد طولي گياه…………………………………………………………………………………………
65
فهرست تصاوير
عنوان
صفحه
4-1- رنگ آميزي گرم اندوفيت ها…………………………………………………………………………………………………
42
4-2- کشت اندوفيت ها در محيط کشت api 20E…………………………………………………………………………
43
شکل 4-3 کشت اندوفيت ها در SIM و بررسي حرکت آنها…………………………………………………………….
44
4-4- کشت اندوفيت ها روي Blood agar و بررسي هموليز آنها…………………………………………………..
44
4-5- تعيين توالي نمونه M1- پرايمر Rev……………………………………………………………………………………
45
4-6- همولوژي 97% نمونه M1 – پرايمر Rev با Bacillus cereus…………………………………………….
46
4-7- تعيين توالي نمونه M2 – پرايمر Rev…………………………………………………………………………………
47
4-8- همولوژي 97% نمونه M2 پرايمرRev با Bacillus thuringiensis……………………………………..
48
4-9- تعيين توالي نمونه N1 – پرايمر Rev………………………………………………………………………………….
49
4-10- همولوژي 97% نمونه N1 – پرايمر Rev با Bacillus thuringiensis……………………………….
50
4-11- تعيين توالي نمونه N2- پرايمر Rev………………………………………………………………………………….
51
4-12- همولوژي 97% نمونه N2 – پرايمر Rev با Bacillus sp……………………………………………………
52
4-13- تعيين توالي نمونه B1 – پرايمر Rev……………………………………………………………………………….
53
4-14- همولوژي 97% نمونه B1 – پرايمر Rev با Bacillus sp……………………………………………………
54
4-15- تعيين توالي نمونه B2 – پرايمر Rev……………………………………………………………………………….
55
4-16- همولوژي 97% نمونه B2 – پرايمر Rev با ……………….Bacillus thuringiensis
56
شکل 4-17بازدارندگي رشد جدايه ها عليه قارچ آسپرژيلوس نايجر بر حسب سانتيمتر……………………..
59
شکل4-18اثر بازدارندگي رشد جدايه هاي مختلف باکتريايي در مقايسه با شاهد روي بيماريگر قارچي آسپرژيلوس نايجر………………………………………………………………………………………………………………………..
59
شکل 4-19بازدارندگي رشد جدايه ها عليه قارچ فوزاريوم اکسيپوروم بر حسب سانتيمتر…………………….
60
شکل 4-20 اثر بازدارندگي رشد جدايه هاي مختلف باکتريايي در مقايسه با شاهد روي بيماريگر قارچي
فوزاريوم اکسي پوروم…………………………………………………………………………………………………………………..
60
4-21- بازدارندگي رشد جدايه ها عليه قارچ آلترناريا آلترناتا بر حسب سانتيمتر………………………………..
64
4-22- اثر بازدارندگي رشد جدايه هاي مختلف باکتريايي در مقايسه با شاهد روي بيماريگر قارچي آلترناريا آلترناتا……………………………………………………………………………………………………………………………
65
4-23- بازدارندگي رشد جدايه ها عليه قارچ موکور برحسب سانتيمتر……………………………………………..
66
4-24- اثر بازدارندگي رشد جدايه هاي مختلف باکتريايي در مقايسه باشاهد روي بيماريگر قارچي موکور
67
4-25 اثر آنتاگونيستي اندوفيت هاي بومي از مارچوبه ، نعناع فلفلي و بابونه روي قارچ هاي مختلف………
67
4-26 اثر تلقيح جدايه هاي اندوفيت گياه ماچوبه (M1 و M2 ) روي ارتفاع گياه مارچوبه…………………..
68
4-27 تلقيح و عدم تلقيح در گياه مارچوبه………………………………………………………………………………………
69
4-28 تلقيح و عدم تلقيح در گياه نعناع فلفلي ………………………………………………………………………………..
69
4-29 اثر تلقيح جدايه هاي N1 و N2 روي رشد گياه نعناع فلفلي بر حسب سانتيمتر………………………..
70
4-30 تلقيح و عدم تلقيح در گياه بابونه…………………………………………………………………………………………..
70
4-31 اثر تلقيح جدايه هاي B1 و B2 روي رشد گياه بابونه بر حسب سانتيمتر…………………………………
71
چکيده
اندوفيت ها ميکروارگانيسم هايي اند که حداقل بخشي از زندگي خود را در گياه به سر مي برند. آنها از گياه سود مي برند و از مواد مغذي گياه استفاده مي کند و گياه نيز به نوبه ي خود با کاهش استرس وافزايش رشد از اين تعامل سود مي برد. در گذشته تصور مي شد که باکتري هاي اندوفيت باعث بيماري زايي خفيفي در گياهان مي شوند اما تحقيقات اخير ثابت نمود که اين دسته از باکتري ها قادر هستند رشد گياه را بهبود بخشيده و سبب افزايش مقاومت عليه بيمارگرهاي گياهي شوند. در اين مطالعه به جداسازي اندوفيت هاي سه گياه داروئي به نام هاي نعناع فلفلي، بابونه و مارچوبه پرداخته شد که نمونه گياهان از سه منطقه استان گلستان جمع آوري شد. نتايج حاصل از شناسايي، سويه هاي جدا شده را در جنس باسيلوس قرار داد. شش باکتري اندوفيت (هر گياه دو اندوفيت) جداشد. اندوفيت هاي جدا

دسته بندی : No category

دیدگاهتان را بنویسید